分光光度计主要用于定性分析和定量分析。

定性分析主要是用于测量某一事物是什么物质，它主要利用的是物质对光的选择性吸收，一种物质在特定的波长下有一个特征性的吸收峰。定量分析主要是用测量某一物质的浓度，它主要利用的是琅伯-比尔定律，利用标准曲线、系数法得到物质的浓度。琅伯-比尔定律的物理意义是当一束平行的单色光通过某一均匀的有色溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和光程的乘积成正比，其数学表达式为：A=lgI。/I =K2bC

1、琅伯定律

分光光度计的工作原理主要是基于琅伯-比尔定律，18世纪初，琅伯在前人的基础上，进一步研究了物质对光的吸收与物质厚度的关系，并于1760年指出：如果溶液的浓度一定，则光对物质的吸收程度与它通过的溶液厚度成正比，这就是琅伯定律，其数学表达式为：A=lgI。/I=K。b式中，A为吸光度；I。为入射光强度；I为透射光强度；b为液层厚度（即光程）；K。为比例常数。

2、比尔定律

1852年，比尔研究了各种无机盐的水溶液对红光的吸收后指出：光的吸收和光所遇到的吸光度的数量有关；如果吸光物质于不吸光的溶剂中，则吸光度和吸光物质的浓度成正比，这就是比尔定律，其数学表达式为：A=lgI。/I=K1C式中，A为吸光度；I。为入射光强度；I为透射光强度；C为溶液的浓度；K1为比例常数。 

3、琅伯-比尔定律 

将琅伯定律和比尔定律结合起来，则为琅伯-比尔定律，公式如下：A=lgI。/I=K2bC

式中，A为吸光度；I。为入射光强度；I为透射光强度；C为溶液的浓度；b为液层厚度（即光程）；K1为比例常数。

比尔定律认为：当一束光平行的单色光通过某一均匀的有色溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和光程的乘积成正比，这就是琅伯-比尔定律的真正物理意义，它是光度分析中定量分析的最基础、最根本的依据，也是紫外可见分光光度计的基本原理。